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多样品组织研磨仪在分析藻类叶绿素上的应用
点击次数:40 发布时间:2018-07-23

    藻类的特异性色素是叶绿素、叶黄素和胡萝卜素。浮游藻类里常见的三种叶绿素是叶绿素a,b和c.叶绿素a在一切浮游藻类里大约占有机物干重的1~2%,是估计藻类生物量的好指标.细胞的叶绿素含量随种类或类群而有所不同,同时还受年龄、生长率、光和营养条件的影响.脱镁叶绿素a(一种叶绿素a的普通降解产物)能够干扰叶绿素a的测定,因为如果存在脱镁叶绿素a,它能在叶绿素a的相同光谱区吸收光和荧光,造成叶绿素a值的误差.当测定叶绿素a的时候还要测定脱镁叶绿素a.叶绿素a和脱镁叶绿素a之比可作为浮游植物生理条件的一个良好指标。多样品组织研磨仪在研究工作中起到制样的作用,为研究提供有效的帮助。

    检测限随荧光计结构与流速而变,但对于大多数叶绿素与它们的降解产物来说,每次进样检测限范围在10~100pg.HPLC法的精确度主要取决于色素标准样的纯度.更理想的方法是测定标准样的吸收光谱(350~750nm)并与文献数据相比较.色素的纯度也可用HPLC法来测定,条件是不存在能与标准物的吸收和荧光谱带相重叠的共洗脱污染物.如果分光光度法测得的数据经脱镁色素校正,HPLC的结果表达为色素当量(例如:叶绿素a当量=脱植基叶绿素a+叶绿素a+叶绿素ac,假定使用正确的分子量校正值),那么HPLC法与分光光度法提供的色素浓度与提供的EPA标准符合得很好.因此如果明显的存在色素衍生物,用分光光度法测得的数据会偏高.要HPLC法与荧光法测得的数据一致则取决于附加的叶绿素b,c和它们的衍生物.

    通过先前多样品组织研磨仪制备的标准物校准HPLC系统的工作标准.混合1ml标准物与300LL蒸馏水,摇动,平衡5分钟后进样.用300LL标准液漂洗注射器2次,注射器中吸入500LL标准液用于进样,将注射器插入进样阀,充满200LL的进样环管.混合1ml90%丙酮与300LL蒸馏水作为空白液.建立标准色素浓度与荧光峰面积(或高)的标准曲线.这种方法为叶绿素与类胡萝卜素的分离而设计,同时也可以分离主要的叶绿素分解产物.方法的精确度由测定三倍进样的浮游植物群落和植物的提取物确定.使用合适的内标物可提高精确度。

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