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多频超声波细胞破碎仪相关操作建议知悉
点击次数:65 发布时间:2018-10-23
   多频超声波细胞破碎仪相关操作建议知悉
  单细胞有机体(微生物)含有半透性坚韧的细胞外壁,包围原浆(细胞)膜和细胞质。细胞质由核酸、蛋白、碳水化合物、脂质、酶、有机离子、维生素、色素、包涵体,以及80%的水组成。要从细胞内分离和提取任何这些成分,必须破碎细胞壁和原浆膜。有时细胞可以泌出所需要的物质,但是,在多数情况下,必须用超声波破碎细胞壁才可以放出这些物质。
  微生物对超声波分解的灵敏度大不相同。例如,最容易分解的是杆状的(杆菌),而球形微生物(球菌)要难于分解得多的。分枝杆菌属特别难于破碎,结核菌就是其中之一种。一般地说,动物细胞比植物细胞易于分解,红血球比肌细胞要易于分解得多,因为红细胞没有保护性的细胞壁。
  多频超声波细胞破碎仪超声波处理时,样品中的分子运动一般地会引起温度上升,特别是在容积较小的情况下是这样的。因为高温降低空化作用,应当尽可能地保持样品低温,zui好是刚好在冰点之上。这可以通过把样品浸入在冰盐水浴中达到。还可以通过使用脉冲超声波,也就是说主样品承受几个短的超声波簇,使温升最小化。
  可以通过增加液压和增加粘度的方法促进细胞破碎。处理微生物时,加入0.05-0.5mm直径的玻璃珠,由于集中空化释放的能量,也因为物理碾压作用,可以促进细胞破碎。在破碎孢子和酵母菌时,玻璃珠几乎是前提条件。较好的比例是一体积玻璃珠,两个体积液体。
  在处理难破碎的细胞时用溶菌酶之类的酶进行预处理比较好。有人把蜗牛酶成功地用于酵母、溶葡球菌酶成功地用于葡萄球菌、胶原蛋白酶成功地用于皮肤和软骨,还把透明酯酸胰蛋白酶成功地用于肝和肾。
  如果不能够使用酶,可以考虑以下的处理过程:在-70C把样品冷冻过夜,在刚要进行超声波破碎前溶成冰水。
  只要有可能,应当把组织切得非常细小使之能够在水中移动。皮肤及肌肉之类的坚韧组织应当先用搅切机之类的均浆10秒钟,并且在超声波处理时封闭装在小容器中。如果对实验没有损害也可以采用冷冻后再磨碎的方法。如果希望不破坏亚细胞颗粒,应当把幅度设置得较低,而处理时间作相应的延长。
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