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一起研究细胞超声破碎的具体应用
点击次数:31 发布时间:2018-11-30
   一起研究细胞超声破碎的具体应用
  非接触式超声波细胞破碎仪将电能通过换能器转换为声能,这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡,这些小气泡迅速炸裂,产生的象小弹一样的能量,从而起到破碎细胞等物质的作用。其结构组成包括超声波发生器、换能器和隔音箱等。
  细胞超声破碎具体应用:
  1.大肠杆菌的超声破碎(革兰氏阴性菌)
  大肠杆菌发酵后,经过离心收集菌体,菌体用磷酸盐缓冲液PBS按1:10的比例进行重悬菌体,冰浴。设定超声破碎仪的参数,超声功率700W,超声时间5s,间隙时间5s,全程时间25min,保护温度20℃,超声结束后,离心,取上清或沉淀进行后续实验。
  2.芽孢杆菌的超声破碎(革兰氏阳性菌)
  一般在缓冲液中加入溶菌酶以促进细胞的裂解。
  3.酵母菌的超声破碎(大肠杆菌的超声破碎方法对酵母处理效果不好)
  超声功率900W,超声时间5s,间隔时间5s,全程时间20-30分钟。操作时先取1克左右(湿重)离心收集的菌体,加10毫升裂解液(强裂解液或蜗牛酶),混匀后即可开始。超声结束后,离心,取上清进行后续实验。
  非接触式超声波细胞破碎仪的使用要注意:
  1.切记空载(一定要将超声变幅杆插入样品后才能开机)。
  2.变幅杆(超声探头)入水深度:1.5cm左右,液面高度zui好有30mm以上,探头要居中,不要贴壁。超声波是垂直纵波,插入太深不容易形成对流,影响破碎效率。
  3.超声参数设置:设置键好仪器工作参数,对于对温度要求比较敏感的样品(比如细菌)一般外面采用冰浴,实际温度肯定是低于25度,蛋白核酸肯定不会变性。
  4.时间:超声时间每次zui好不要超过5秒,间隙时间应大于或等于超声时间,以便于热量散发。时间设定应以超声时间短,超声次数多为原则,可延长超声机子以及探头的寿命。
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